アレクサフルオール
Alexa Fluor蛍光色素ファミリーは、 Molecular Probes社（現在はThermo Fisher Scientific社傘下）が発明し、Invitrogenのブランド名で販売されている色素シリーズです。Alexa Fluor色素は、蛍光顕微鏡や細胞生物学において、細胞や組織の標識として頻繁に使用されています。[ 1 ] Alexa Fluor色素は、一次抗体または二次抗体に直接結合させることで、シグナルと感度を増幅することができます。 [ 2 ]あるいは他の生体分子 との結合も可能です。
Alexa Fluorシリーズの励起および発光スペクトルは可視スペクトルから赤外線までをカバーしています。[ 3 ]ファミリーの個々のメンバーは、おおよそナノメートル単位の励起最大値に従って番号が付けられています。
歴史
Molecular Probes社の創設者であるRichard および Rosaria Haugland は、生物学研究に応用できる蛍光染料の研究で、生物学および化学の分野でよく知られています。Molecular Probes 社が設立された当時は、そうした製品はほとんど市販されていませんでした。現在広く使用されている多くの蛍光染料は、Molecular Probes 社の研究室で発見され、開発されました。テキサスレッド、カスケードブルー、オレゴングリーン、マリーナブルー、Alexa Fluor ファミリーなどの染料です。これらの中で最も有名な Alexa Fluor ファミリーの染料は、以前に開発された生物学的蛍光染料ファミリーの特性を改良し、それらのいくつかの問題を解決するように設計されました。Alexa Fluor 染料は、Richard および Rosaria Haugland の息子、Alex Haugland にちなんで命名されました。
Molecular Probes社は2003年にInvitrogen社に買収され、[ 4 ] Alexa Fluorファミリーのさらなる拡充を目指し、発光スペクトルでカバーされていない領域を補うための新たな色素を追加した。2008年、Invitrogen社とApplied Biosystems社が合併した後、Invitrogen社とAlexa Fluor製品ラインはLife Technologies社の一部となった。2014年、Life Technologies社はThermo Fisher Scientific社に買収され、 Invitrogen社の名称とブランドが刷新され、Alexa Fluor製品ラインが再び傘下に入った。
染料と化学
Alexa Fluor 色素は、クマリン、ローダミン、シアニン色素、およびキサンテンファミリー(業界標準のフルオレセインが含まれる)のよく知られたファミリーにスルホン化と追加の化学修飾を施すことで化学的に合成されました。スルホン化によって、 Alexa Fluor 色素は負に帯電し、親色素よりも親水性と溶解性が高くなりました。追加の修飾は、他の領域での色素性能を向上させることを目的としていました。たとえば、スルホン化され、その他の点でも化学的に修飾されたフルオレセインである Alexa Fluor 488 は、フルオレセインイソチオシアネート色素に特徴的な、急速な光退色と pH 依存の蛍光強度というよく知られた問題を解決するように設計されました。
| カラー† [ 5 ] | 吸収（nm）[ 6 ] | 放射波長（nm）[ 6 ] | MM (g/mol) | ε (cm −1 M −1 ) [ 6 ] | 量子収率[ 7 ] | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| アレクサフルオール350 | 青 | 346 | 442 | 410 | 19,000 | - |
| — 405 | 青 | 401 | 421 | 1028 | 35,000 | - |
| — 430 | 緑 | 434 | 541 | 702 | 15,000 | - |
| — 488 | 緑 | 495 | 519 | 643 | 73,000 | 0.92 |
| — 500 | 緑 | 502 | 525 | 700 | 71,000 | - |
| — 514 | 緑 | 517 | 542 | 714 | 80,000 | - |
| — 532 | 黄色 | 532 | 554 | 721 | 81,000 | 0.61 |
| — 546 | 黄色 | 556 | 573 | 1079 | 112,000 | 0.79 |
| — 555 | オレンジ | 555 | 565 | 約1250 | 155,000 | 0.1 |
| — 568 | オレンジ | 578 | 603 | 792 | 88,000 | 0.69 |
| — 594 | 赤 | 590 | 617 | 820 | 92,000 | 0.66 |
| — 610 | 赤 | 612 | 628 | 1172 | 144,000 | - |
| — 633 | 遠赤外線 | 632 | 647 | 約1200 [ 8 ] | 159,000 | - |
| — 635 | 遠赤外線 | 633 | 647 | - | 140,000 | - |
| — 647 | 遠赤外線 | 650 | 665 | 1155.06 [ 9 ] | 270,000 | 0.33 |
| — 660<extra_id_1> 近赤外線 | 663 | 690 | 約1100 | 132,000 | 0.37 | — 680 |
| 679 | 663 | 約1150 | 702 | 183,000 | 0.36 | — 700 |
| 723 | 663 | 702 | 約1400 | 205,000 | 0.25 | — 750 |
| 749 | 663 | 775 | 約1300 | 290,000 | 0.12 | — 790 |
| 782 | 663 | 805 | 約1750 | 260,000 | † = 発光スペクトルのおおよその色ε =消衰係数 | - |
| 他の染料との比較 | ||||||
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Alexa Fluorシリーズの色素は、合成元となった元の色素（フルオレセイン、ローダミンなど）に比べてpH依存性が低く、光安定性に優れています。このシリーズの各色素の吸光係数は既知ですが（表を参照）、量子収率と寿命は未知です。輝度の比較も概ね良好です。
Alexa Fluor 色素製品ラインの各製品には、他の市販製品ラインの代替品があります。他の色素との比較は、使用する条件や手法によって一貫性が低く、さらに「繊細」な結果となる場合があります。このような比較は、使用する条件や手法、そして必要な色素性能（シグナル、バックグラウンド、安定性）に応じて検討する必要があります。
具体的な比較研究
- DNAへの結合を伴う用途において、Alexa Fluor 647色素とCy5色素を比較した。[ 10 ]
さらに詳しい情報
- 「分子イメージングおよび造影剤データベース（MICAD）、2004～2013」。メリーランド州ベセスダ：国立生物工学情報センター（米国）。2013年。PMID 20641179。 2020年3月1日閲覧 Alexa Fluor 製品番号 488、647、680、700、750、およびその他の共役形式について、独立した専門家によって書かれたデータベース エントリ。
- Hullin-Matsuda, F.; Murate, M.; Kobayashi, T. (2018年9月25日). 「スフィンゴミエリンとセラミドホスホエタノールアミンを可視化するタンパク質プローブ」. Chem. Phys. Lipids . 216 : 132–141 . doi : 10.1016/j.chemphyslip.2018.09.002 . PMID 30194925. S2CID 52179117 . Alexa Fluors の脂質可視化アプリケーションのレビュー。
- コズマ、Ｅ．ジャヤセカラ、PS;スクアルシアルピ、Ｌ．パオレッタ、S.モロ、S.フェデリコ、S.スパルト、G.ジェイコブソン、KA (2013 年 1 月 1 日) 「アデノシン受容体の蛍光リガンド」。バイオオルグ。医学。化学。しましょう。23 (1): 26–36。土井: 10.1016/j.bmcl.2012.10.112。PMC 3557833。PMID 23200243。 受容体結合研究のためのAlexa Fluor (AF) 488をベースとした蛍光体セットのレビュー。本稿では、AF488とAF532の構造に加え、Cy5、Texas Red、EVOBlue、FITC、NBD、Dansyl、1-ピレン、そして様々なBodipy複合体といった、他の標準的な蛍光体セットについても紹介する。
参考文献
- ^ Invitrogenスタッフ (2007年6月6日). 「Alexa Fluor Dyes Spanning the Visible and Infrared Spectrum」 . Probes.Invitrogen.com . 2007年8月11日時点のオリジナルよりアーカイブ。2007年8月13日閲覧。
- ^ ThermoFisher Staff (2017年5月26日). 「Alexa Fluor二次抗体」 . ThermoFisher.com . 2017年5月26日閲覧。
- ^ Invitrogenスタッフ (2006年4月6日). 「Alexa Fluor Dyeシリーズ」 . Probes.Invitrogen.com . 2007年8月15日時点のオリジナルよりアーカイブ。2007年8月13日閲覧。
- ^ 「Invitrogenが3億2500万ドル相当の債券を値付け、購買力を維持 [2003年7月30日付BioWOrld記事の無断転載]」 AllBusiness.com 、 2009年11月4日。 2010年8月24日時点のオリジナルよりアーカイブ。 2020年3月1日閲覧。また、 Huggett, Brady (2003年7月30日). 「Invitrogenが3億2500万ドル相当の債券を価格設定、購買力を維持」 も参照。BioWorld.com 。 2020年3月1日閲覧。
- ^ ThermoFisher Staff (2020年2月26日). 「蛍光体の選択」 . Thermofisher.com . 2020年3月1日閲覧。
- ^ a b c LifeTechnologiesスタッフ (2020年2月26日). 「Alexa Fluor Dyeシリーズ—注1.1」 . LifeTechnologies.com . 2020年3月1日閲覧。
- ^ Invitrogenスタッフ（2011年4月26日）「Alexa Fluor色素の蛍光量子収率（QY）と寿命（τ）[表1.5]」 Invitrogen.com 2011年4月26日閲覧。
- ^ ThermoFisher Staff (2018年1月8日). 「Alexa Fluor 633 NHS Ester (Succinimidyl Ester)」 . ThermoFisher.com . 2018年1月8日閲覧。
- ^ Esteban, A.; Popp, MW; Vyas, VK; Strijbis, K.; Ploegh, HL; Fink, GR (2011年8月23日). 「マクロファージにおける真菌認識はデクチン-1とガレクチン-3の会合によって媒介される」 . Proc. Natl. Acad. Sci. USA . 108 (34): 14270– 14275. Bibcode : 2011PNAS..10814270E . doi : 10.1073 / pnas.1111415108 . PMC 3161568. PMID 21825168 .
- ^ Ballard JL; Peeva VK; deSilva CJ; Lynch JL; Swanson NR (2007年7月). 「DNAマイクロアレイの実用化に向けたAlexa FluorとCyDyeの比較」 . Molecular Biotechnology . 36 (3): 175– 83. doi : 10.1007/s12033-007-0006-4 . PMID 17873405. S2CID 37365037. 2010年10月23日閲覧.
外部リンク
