好塩基球活性化
アレルギー症状は、活性化した好塩基球と肥満細胞による全身へのヒスタミン放出によって引き起こされ、喉頭浮腫、下気道閉塞、低血圧を伴うショックを引き起こす可能性があります。そのため、好塩基球は肥満細胞とともにアレルギー疾患における重要な細胞と考えられています。
アクティベーションプロセス
免疫グロブリンE（IgE）は、哺乳類にのみ存在する抗体（または免疫グロブリン「アイソタイプ」）の一種です。アレルギーにおいて重要な役割を果たし、特に1型過敏症と関連しています。IgEの定常領域であるFc領域に対する受容体（FcεR）は、肥満細胞や好塩基球など、いくつかの種類の細胞に存在します。好塩基球は細胞内に多くの顆粒を有し、その中には脱顆粒によってアレルギー反応を引き起こす様々な活性物質が含まれています。IgEの特異的な可変領域であるFab領域に結合できるアレルゲンに結合したIgE抗体がFc受容体に結合すると、細胞は活性化され、脱顆粒を開始します。
試験管内アレルギー試験法
アレルギーの特定には、多くの場合、皮膚テストの陽性反応が用いられますが、抗IgE抗体による好塩基性顆粒球の活性化、細胞表面（細胞膜）上のCD63抗原の発現を利用することで、一般的なスクラッチテストを実施することなく、過敏症反応の原因となるアレルゲンを特定することができます。この検査には少量の血液しか必要としないため、通常の血液検査と並行して実施できるため、利便性に優れています。様々なアレルギー（例：ハチ毒、薬物、造影剤[ 1 ]）に使用できます。
脱顆粒
脱顆粒細胞は外細胞膜上にCD63 [ 2 ]分子を露出させ、その結果、CD63分子を内表面に含む顆粒が細胞膜と融合する。顆粒の内細胞表面は、脱顆粒過程において好塩基球／肥満細胞の外細胞表面となる。
| 材料 | 目的 |
|---|---|
| BSB | 好塩基球刺激 |
| IL-3 | 好塩基球刺激 |
| アレルゲン | |
| EDTA | 脱顆粒ストッパー |
| マーカー | 好塩基球をマークする |
| 溶解液 | 赤血球を溶解する |
| 遠心 | 赤血球をスピンダウンする |
| PBS | 溶解液を洗い流す |
| ファックス | 細胞を数える |
ラベル付けと分類
フローサイトメトリーは、多数の細胞を分析し、低濃度であっても細胞集団を同定するための有用なツールであるため、アレルゲンによるin vitro刺激後に活性化され、CD63マーカーを発現する好塩基球の割合を測定することができます。CD63マーカーは、 CD63タンパク質に結合可能なフルオレセインイソチオシアネート標識抗原であり、FACS（蛍光活性化セルソーター/ソーター）による細胞選別に使用されます。このFITC標識抗原は、530 nmの波長で発光します。発光される蛍光強度は各細胞の結合部位に比例するため、CD63発現細胞に結合したFITC標識抗体の数に応じて強度が増加します。
手順
試験管に、インターロイキン3と検査対象のアレルゲンを含む好塩基球刺激緩衝液（BSB）を準備します。血液サンプルを加え、試験管を37℃で数分間インキュベートし、アレルゲンがIgEに結合することを確認します。試験管にEDTAを加えることで、脱顆粒プロセスは直ちに停止します。脱顆粒後、CD63マーカー（標識抗体）を試験管に加えます。室温で数分間放置することで、マーカーが好塩基球の細胞膜上のCD63タンパク質に結合する時間を与えます。溶解ステップで赤血球を溶解します。赤血球は白血球をはるかに上回っているため、好塩基球のFACS分析を行うには、赤血球を除去する必要があります。
参照
参考文献
- ^ Böhm I et al.造影剤による好塩基球活性化に関するパイロットスタディ. Fundam Clin Pharmacol 2011;25:267-276
- ^ Janeway CA, Jr.他 (2001).免疫生物学（第5版）. Garland Publishing. ISBN 0-8153-3642-X（NCBI Bookshelf 経由の電子全文）
外部リンク
