pBR322

制限部位が青で示された pBR322 ベクターの概略図。

pBR322はプラスミドであり、大腸菌のクローニングベクターとして広く使用された最初のベクターの一つです。1977年にカリフォルニア大学サンフランシスコ校のハーバート・ボイヤー研究室で作成され、ポスドク研究員のフランシスコ・ボリバル・サパタとレイモンド・L・ロドリゲスにちなんで命名されました。pは「プラスミド」、BRは「ボリバル」と「ロドリゲス」を表しています。

pBR322は4361塩基対の長さ[1]で、2つの抗生物質耐性遺伝子、すなわちアンピシリン耐性を付与するblaTEM-1とテトラサイクリン耐性を付与するtetAを持っています。[2] pMB1の複製起点と、プラスミドコピー数の制限因子をコードするrop遺伝子が含まれています。このプラスミドは40を超える制限酵素に対する固有の制限部位を持っています。この40部位のうち11はtetA遺伝子内にあります。tetA遺伝子のプロモーター内にはHindIIIとClaIの2つの制限部位があります。blaTEM -1遺伝子内には6つの重要な制限部位があります。抗生物質耐性遺伝子は、テトラサイクリンの場合はpSC101、アンピシリンの場合はRSF2124に由来します。[3]抗生物質耐性遺伝子の制限部位は、挿入不活性化を可能にします。

背景

pBR322は、初期のクローニングベクターとして最も広く用いられた。[4]選択マーカーとして2つの抗生物質耐性遺伝子と、クローニングベクターとして適した40以上のユニークな制限酵素部位を有する。このプラスミドは、主に3つの遺伝子源、すなわちpSC101のテトラサイクリン耐性遺伝子、RSF2124のアンピシリン耐性遺伝子、そしてColE1類似プラスミドであるpMB1の複製要素から構築された。[5] [6]

pBR322をベースにした多数のプラスミドが、様々な目的のために特別に設計されて構築されている。[7] [3]例としては、pUCシリーズのプラスミドが挙げられる。[8]染色体外タンパク質発現用の発現ベクターやシャトルベクターのほとんどにはpBR322複製起点が含まれており、pBR322の断片は、種内シャトルベクターやバイナリベクター、染色体からのDNAの標的組み込みや切除のためのベクターの構築に非常によく使われている。[9]

DNA配列

pBR322の配列は[10]である。

pBR322
 1 ttctcatgtt tgacagctta tcatcgataa gctttaatgc ggtagtttat cacagttaaa 61 ttgctaacgc agtcaggcac cgtgtatgaa atc​​taacaat gcgctcatcg tcatcctcgg 121 caccgtcacc ctggatgctg taggcatagg cttggttatg ccggtactgc cgggcctctt 181 gcgggatatc gtccattccg acagcatcgc cagtcactat ggcgtgctgc tagcgctata 241 tgcgttgatg caatttctat gcgcacccgt tctcggagca ctgtccgacc gctttggccg 301 ccgcccagtc ctgctcgctt cgctacttgg agccactatc gactacgcga tcatggcgac 361 cacacccgtc ctgtggatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac 421 aggtgcggtt gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca 481 cttcgggctc atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccgggg 541 actgttgggc gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct 601 caacctacta ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaccgat 661 gcccttgaga gccttcaacc cagtcagctc cttccggtgg gcgcggggca tgactatcgt 721 cgccgcactt atgactgtct tctttatcat gcaactcgta ggacaggtgc cggcagcgct 781 ctgggtcatt ttcggcgagg accgctttcg ctggagcgcg acgatgatcg gcctgtcgct 841 tgcggtattc 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本

マイケル・クライトンの1990年のSF小説『ジュラシック・パーク』では、ジュラシック・パーク研究所の訪問者に「恐竜のDNAの小さな断片の実際の構造」が示されています。1992年、NCBIの研究者マーク・ボグスキーはBLASTを用いて『ジュラシック・パーク』の配列を既知のDNA配列と比較し、本の配列がpBR322の3つの配列で構成されており、そのうち1つが2回繰り返され、短いランダム配列で区切られていることを発見しました。ボグスキーはこの研究をユーモラスな論文としてまとめ、BioTechniques誌に掲載しました。[11] [12]

参考文献

  1. ^ Watson, Ned (1988年10月). 「プラスミドpBR322の配列の新たな改訂」. Gene . 70 (2): 399– 403. doi :10.1016/0378-1119(88)90212-0.
  2. ^ メイ・ティティワット、伊藤明伸、岡部聡（2009年11月）「テトラサイクリン耐性遺伝子とアンピシリン耐性遺伝子の相互作用による大腸菌バイオフィルムにおける多剤耐性機構の誘導」抗菌剤と化学療法. 53 (11): 4628– 4639. doi :10.1128/AAC.00454-09. ISSN  1098-6596. PMC 2772303 . 
  3. ^ ab バルバス、パウリナ;ソベロン、ザビエル。メリノ、エンリケ。ズリタ、マリオ。ロメリ、ヒルダ。ヴァッレ、フェルナンド。フローレス、ノエミ。ボリバル、フランシスコ（1986年1月）。 「プラスミドベクター pBR322 とその特殊目的誘導体 — レビュー」。遺伝子。50 ( 1–3 ): 3–40 .土井:10.1016/0378-1119(86)90307-0。
  4. ^ オールド, RW; プリムローズ, サンディ B. (1996).遺伝子操作の原理：遺伝子工学入門（第5版）. オックスフォード: ブラックウェル・サイエンティフィック出版. pp.  53– 61. ISBN 978-0632037124。
  5. ^ Bolivar, Francisco; Rodriguez, Raymond L.; Betlach, Mary C.; Boyer, Herbert W. (1977年11月). 「新規クローニングベクターの構築と特性評価 I. プラスミドpMB9のアンピシリン耐性誘導体」. Gene . 2 (2): 75– 93. doi :10.1016/0378-1119(77)90074-9.
  6. ^ Bolivar, Francisco; Rodriguez, Raymond L.; Greene, Patricia J.; Betlach, Mary C.; Heyneker, Herbert L.; Boyer, Herbert W.; Crosa, Jorge H.; Falkow, Stanley (1977年11月). 「新しいクローニングビークルの構築と特性評価。II. 多目的クローニングシステム」Gene . 2 (2): 95– 113. doi :10.1016/0378-1119(77)90000-2.
  7. ^ Primrose, Sandy B.; Twyman, Richard (2009). Principles of Gene Manipulation and Genomics (PDF) (第7版). Hoboken: John Wiley & Sons, Ltd. pp.  64– 65. ISBN 9781405135443。
  8. ^ Yanisch-Perron, Celeste; Vieira, Jeffrey; Messing, Joachim (1985年1月). 「改良型M13ファージクローニングベクターと宿主株：M13mpl8およびpUC19ベクターのヌクレオチド配列」. Gene . 33 (1): 103– 119. doi :10.1016/0378-1119(85)90120-9.
  9. ^ パウリナ・バルバス;アルジェリア・ローレンス編(2004 年 4 月)。組換え遺伝子発現: レビューとプロトコール(第 2 版)。 Humana Press Inc.、77 ～ 85 ページ。ISBN 978-1592597741。
  10. ^ 「クローニングベクターpBR322、完全配列」GenBank国立医学図書館 2008年9月30日
  11. ^ Boguski, Mark S. (1992). 「分子生物学者がジュラシック・パークを訪問」(PDF) . BioTechniques . 12 : 668–669 . 2020年12月13日時点のオリジナル(PDF)からアーカイブ。
  12. ^ 「マイケル・クライトン著『ジュラシック・パーク』出版後レビュー」ダン・グラウアー2018年12月9日. 2025年4月14日閲覧。
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